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5XFAD

更新時間：2017-02-13   點擊次數(shù)：7190次

5XFAD小鼠基因檢測報告-2016.9.7

動物品系： 5XFAD 小鼠                  操作日期：2016.9.5-2016.9.7

1.主要試劑         

試劑名稱

生產(chǎn)廠家

備注

上游引物oIMR 3610

Invitrogen

√

下游引物oIMR 3611

Invitrogen

√

上游引物oIMR1644

Invitrogen

√

下游引物oIMR 1645

Invitrogen

√

陽性內(nèi)標oIMR7338

Invitrogen

√

陽性內(nèi)標oIMR7339

Invitrogen

√

TE緩沖液

Invitrogen

√

瓊脂糖

Invitrogen

√

Sybr Safe 染液

Invitrogen

√

TAE緩沖液

自制

√

EmeraldAmp PCR Master Mix

TAKARA

√

RNase-free水

GIBCO

√

注：實驗中用到的試劑在備注項打“√”，沒有用到的試劑打“—”，與列表不一致的試劑在備注中說明。

2.主要儀器： 

儀器名稱

生產(chǎn)廠家

儀器型號

儀器編號

備注

MINI離心機

FORCE

SBC140-2

SB0363

√

漩渦混合儀

Scientific Industries

G560E

SB0484

√

電子天平

AL104-IC

梅特勒托利多

SB0006

√

PCR儀

BIO-RAD

Thermal Cycler

SB0407

√

移液器

Thermo/ Eppendorf/Brand

P10/P100/

P200/P1000

SB0108/SB0230

SB0608/SB0089

√

注：實驗中用到的儀器在備注項打“√”，沒有用到打“—”，與列表不一致的在備注中說明。

 

3.PCR操作步驟     

 

試劑

體積（μl）

模板

1

oIMR3610

0.4

oIMR3611

0.4

oIMR1644

0.4

oIMR1645

0.4

oIMR7338

0.4

oIMR7339

0.4

Master mix (2×)

10

RNase-free水

6.6

終體積

20

 

 

4. PCR反應(yīng)條件

94 ℃ 3 min；

94 ℃ 30 sec， 54 ℃ 60 sec，72 ℃ 60 sec  35×；

72 ℃ 5 min；

 

5. 1%瓊脂糖凝膠電泳體系

    稱取 1.6 （1.6g）瓊脂糖加入  100  （100ml）TAE緩沖液中混勻，微波爐加熱兩次沸騰后加7μl染液，混勻，倒入板中凝固。凝固后每孔加入15μl樣本，每行*孔加入5μl Marker。進行凝膠電泳。

6. 拍圖

   完成的凝膠電泳經(jīng)過凝膠成像系統(tǒng)拍圖得出結(jié)果

 

 

 

 

 

7. 結(jié)果判定標準

引物名稱

序列（5’→3’）

PCR產(chǎn)物大小

上游引物oIMR 3610

AGGACTGACCACTCGACCAG

377bp

下游引物oIMR 3611

CGGGGGTCTAGTTCTGCAT

上游引物oIMR1644

AATAGAGAACGGCAGGAGCA

608bp

下游引物oIMR 1645

GCCATGAGGGCACTAATCAT

陽性內(nèi)標oIMR7338

CTAGGCCACAGAATTGAAAGATCT

324bp

陽性內(nèi)標oIMR7339

GTAGGTGGAAATTCTAGCATCATCC

 

 

8. 結(jié)果判定

根據(jù)成像結(jié)果及判定標準，陽性動物編號如下：共計16只

8566、 8582、8584、8573、8586、8588、8577、8590、

8591、 8592、8543、8593、8546、8547、8595、8596