九色在线,在线看国产,日韩欧美亚洲一区二区三区,久久国产成人午夜AV浪潮

歡迎來到凱學(xué)生物科技（上海）有限公司網(wǎng)站！

熱門關(guān)鍵詞：進(jìn)口ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，大鼠elisa試劑盒價格，小鼠elisa試劑盒價格，豬elisa試劑盒，雞elisa試劑盒，兔elisa試劑盒，魚elsa試劑盒，其他種屬elisa試劑盒，豚鼠elisa試劑盒，倉鼠elisa試劑盒，裸鼠ELISA試劑盒，進(jìn)口試劑，血清，動物血清，人血清，胎牛血清，氨基酸試劑，培養(yǎng)基，顯色培養(yǎng)基，大腸桿菌O157培養(yǎng)基，細(xì)菌總數(shù)培養(yǎng)基，金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基，沙門氏菌/賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基， 弧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基，其他培養(yǎng)基，酵母 霉菌 青霉 曲霉培養(yǎng)基， 李斯特氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基，抗體，二抗，一抗，生物試劑，酶生物試劑，蛋白質(zhì)試劑，抗生素試劑，植物激素及核酸試劑，碳水化合物試劑，色素試劑，維生素試劑，表面活性劑，緩沖試劑，其他生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)品對照品類，對照品，對照藥材，標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)準(zhǔn)試劑，Spectrum試劑，美國藥典級試劑等

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > SD大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，使用方法

SD大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，使用方法

更新時間：2019-08-22   點(diǎn)擊次數(shù)：1837次
　　SD大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，使用方法；
 
　　1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：
 
　　取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。
 
　　2、細(xì)胞傳代：
 
　　1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
 
　　2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
 
　　3)棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
 
　　4)待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。
 
　　3、細(xì)胞凍存：
 
　　1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
 
　　2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
 
　　3)用適量的凍存液(FBS：DMSO=9 ：1)重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
 
　　4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
 
　　4、細(xì)胞復(fù)蘇：
 
　　1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意：佩戴防爆管面具)，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
 
　　2)將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
 
　　3)棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
 
　　4)第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
 
　　SD大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，細(xì)胞傳代：收到細(xì)胞后，請對細(xì)胞培養(yǎng)瓶外表進(jìn)行消毒，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行 1-2 小時的緩沖，待細(xì)胞恢復(fù)基本生長狀態(tài)后，進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況：
 
　　(一)細(xì)胞未長至 85%時，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，若培養(yǎng)瓶上無特殊標(biāo)注，吸去剩余培養(yǎng)液，只留 6-8ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
 
　　(二)細(xì)胞已長滿(達(dá) 85-95%)。即可進(jìn)行傳代，具體步驟如下：
 
　　1.棄去培養(yǎng)液，用 PBS 洗滌 1-2 次，
 
　　2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞回縮變圓、透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺，加入雙倍的含 10%血清的*培養(yǎng)液，終止消化并輕輕吹打細(xì)胞，使其變成單細(xì)胞懸液，
 
　　3.將細(xì)胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清，輕彈管底，將細(xì)胞彈散，
 
　　4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代、凍存，
 
　　5.如果沒有特別說明，建議收到細(xì)胞后的次傳代比例為 1:2。